2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)產生的多聚半乳糖醛酸酶(PG)是一個重要的致病因子。本研究以丙酮法提取病菌PG粗蛋白,后依次經DEAESepharose Fast Flow離子交換柱、Phenyl-Sepharose6 Fast Flow疏水柱、SephadexG-75凝膠柱和DE52離子交換柱層析,獲得具有較高活性的PG純化蛋白。該PG蛋白分子量為39.81kD,等電點為4.58;含有糖基(含糖量為1.48%)而不

2、含脂類物質,是一種糖蛋白;蛋白部分含有α-氨基,但不含芳香族氨基酸。經測定,這種PG蛋白在pH4-12范圍內均有活性,但pH5時活性最大;對熱(≥40℃)不穩定,100℃下水浴20min活性完全喪失;對紫外線、氯仿、胰蛋白酶和蛋白酶K均敏感,處理后活性分別下降60.0%、48.3%、65.0%和68.3%。
   根據GenBank中立枯絲核菌PG基因序列(FJ544455、FJ544456、DQ848983)特征設計特異引物,

3、通過PCR技術獲得水稻紋枯病菌多聚半乳糖醛酸酶全長基因Rspg1。該基因大小為1395bp,推測含有5個內含子(57bp、57bp、59bp、66bp、61bp),其序列與玉米紋枯病菌pg1基因(FJ544456)相似性達99%。
   以pET-28a(+)為載體、IPTG為誘導物,將Rspg1基因轉入Escherichia coliBL21(DE3)進行表達。結果表明,在IPTG誘導下,含有Rspg1基因的轉化菌培養破碎上清

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